細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NCI-H1963人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞	英文名稱	NCI-H1963
產(chǎn)品貨號(hào)	AXB6508	培養(yǎng)條件	80% RPMI 1640 + 20% h.i. FBS37 ℃, 5% CO2
生長(zhǎng)特性	懸浮生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	成團(tuán)
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	90% FBS + 10% DMSO
組織來源	肺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

種屬來源；人

組織來源；肺

性別年齡；56歲, 男性

生長(zhǎng)特性；懸浮生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；成團(tuán)

細(xì)胞規(guī)格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件；80% RPMI 1640 + 20% h.i. FBS37 ℃, 5% CO2

凍存條件；90% FBS + 10% DMSO

傳代方法；1:3傳代, 2-3天傳1代

PYCR2       癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子3抗體

IOC4       IOC4

載玻片細(xì)胞APC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒       P5C還原酶2抗體

細(xì)胞色素P450亞酶CYP2C8（DBF）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒       小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa生化檢測(cè)試劑盒

泛素蛋白連接酶C抗體  Anti-UBE2C       原鈣粘蛋白γA8抗體  Anti-PCDHGA8

凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體       Apaf1 Interacting Protein

大鼠胃泌素(Gastrin)elisa檢測(cè)試劑盒      CEAM3

豬圓環(huán)Ⅱ型衣殼蛋白  Anti-capsid protein       鈉氫通道蛋白9家族A9抗體  Anti-SLC9A9ZCCHC8蛋白抗體       ZCCHC8

WB一抗稀釋液 100ml       小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測(cè)試劑盒

堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H&L       Donkey Anti-Guinea Pig IgG H&L / AP

牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgA)elisa生化檢測(cè)試劑盒       Bovine serum albumin(BSA)antibody(IgA)ELISA Kit

小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)elisa生化檢測(cè)試劑盒       GSH-PxELISAKit

倉(cāng)鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) elisa生化檢測(cè)試劑盒       MMP-9 ELISA Kit

NCI-H1963人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞人丁酰膽堿酯酶(BCHE)elisa生化檢測(cè)試劑盒       BCHEELISAkit

抗淬滅劑Ⅰ（活體染色持久發(fā)光）       綿羊甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa生化檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。