細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NCTC1469（NCTC CLONE 1469）小鼠正常肝細(xì)胞	英文名稱	NCTC1469（NCTC CLONE 1469）:NCTC1469NCTC CLONE 1469
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X1086	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	半貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來源	肝臟	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：NCTC clone 1469; NCTC1469；小鼠正常肝細(xì)胞

種屬來源：小鼠

年齡性別：新生

組織來源：肝臟

生長(zhǎng)特性：半貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：CTC 1469細(xì)胞是于1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織；NCTC 1469細(xì)胞可表達(dá)H-2K抗原，鼠痘病毒陰性。

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：NATCC; CCL-9.1 ECACC; 88111403

培養(yǎng)基：90% DMEM+10% 馬血清+雙抗

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

OVOL1       鈣粘蛋白20抗體

組蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白1抗體       HIR1

血液硝酸鹽含量比色法定量檢測(cè)試劑盒       OVOL1蛋白抗體

大鼠補(bǔ)體因子D(adipsin)(CFD)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)       小鼠細(xì)胞周期素D3(CCND3)elisa檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β3抗體（TGFβ3）  Anti-TGF beta 3 propeptide       過氧化還原酶3抗體  Anti-PRDX3/peroxiredoxin 3

2，4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體       2,4-D

人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)elisa生化檢測(cè)試劑盒      Cadherin 20

蛋白酶調(diào)解因子7抗體  Anti-PSMD7       5-羥色胺受體7抗體  Anti-5HT7 Receptor/SR-7鞘氨醇激酶1相互作用蛋白抗體       SPHKAP

大鼠顆粒酶B(Gzms-B)elisa生化檢測(cè)試劑盒       PICOGREEN細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒

PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgG H&L       Mouse Anti-Human IgG H&L / PE-Cy3

人AT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)elisa生化檢測(cè)試劑盒       HumanARID1AELISAKit

小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa生化檢測(cè)試劑盒       sPECAM-1ELISAKit

大鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)elisa生化檢測(cè)試劑盒       GPBAR1 ELISA Kit

NCTC1469（NCTC CLONE 1469）小鼠正常肝細(xì)胞人谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶2抗體(IgG)elisa生化檢測(cè)試劑盒       HumanTransglutaminase2antibodyIgGELISAkit

T噬菌體DNA分離試劑盒       山羊促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)elisa生化檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。