細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞	英文名稱	NIH/3T3:NIH3T3
產(chǎn)品貨號	A01X1090	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	胚胎	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% CS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 NIH/3T3細(xì)胞是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株，建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。NIH/3T3細(xì)胞對肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用；NIH/3T3細(xì)胞鼠痘病毒陰性。

年齡（性別） 胚胎

組織來源 胚胎

細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞

生物等級 1

倍增時間 ~20小時

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1658 ATCC; CRL-6442DSMZ; ACC-59 ECACC; 93061524

Protein Z       后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體

A型流感聚合酶堿性蛋白2抗體       Influenza A Polymerase basic protein 2

小鼠溶酶體酸性磷酸酶2(ACP2)elisa檢測試劑盒       蛋白Z抗體

抗原涂板（COATING）緩沖液       人G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

UBX結(jié)構(gòu)域域蛋白D2抗體  Anti-UBXD2       神經(jīng)特異蛋白酪氨酸磷酸酶N5抗體  Anti-PTPN5/STEP

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域38抗體       ANKRD38

大鼠TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP)elisa檢測試劑盒      CDC27

細(xì)胞色素氧化酶裝配因子PET112抗體  Anti-PET112L       SNAPC3蛋白抗體  Anti-SNAPC3鋅指蛋白BED抗體       ZBED2

環(huán)境鎂離子濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒       山羊白介素6(IL-6)elisa檢測試劑盒

辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgM       Goat Anti-Human IgM / HRP

犬B細(xì)胞瘤因子2(Bcl-2)elisa生化檢測試劑盒       Bcl-2 ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體β(PPAR-β)elisa生化檢測試劑盒       PPAR-βELISAKit

猴白介素6(IL-6)elisa生化檢測試劑盒       IL-6 ELISA Kit

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞人兒茶酚胺(CA)elisa生化檢測試劑盒       CAELISAKit

魚生長(GH)elisa生化檢測試劑盒       大鼠抗繆勒管(AMH)elisa檢測試劑盒

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。