實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠睪丸支持細(xì)胞分離自睪丸；睪丸支持細(xì)胞又稱(chēng)Sertoli細(xì)胞，在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形，細(xì)胞基部附著在基膜上，頂部伸至曲精小管腔面。它是生精細(xì)胞的支架，為其提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能合成與分泌雄**結(jié)合蛋白，為其提供高濃度的雄**環(huán)境等，還具有構(gòu)成血-睪屏障，形成睪丸內(nèi)微環(huán)境，調(diào)節(jié)精子發(fā)生等功能。睪丸支持細(xì)胞是睪丸的主要組成細(xì)胞，能分泌多種生長(zhǎng)因子和抑制因子，不僅可為精子提供營(yíng)養(yǎng)支持和保護(hù)，也能對(duì)其他細(xì)胞，如胰島和神經(jīng)細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)支持，而且當(dāng)其與胰島或神經(jīng)細(xì)胞共移植時(shí)，也能夠?yàn)檫@些細(xì)胞提供保護(hù)，提高植活率。因此，睪丸支持細(xì)胞在細(xì)胞移植中具有廣泛的應(yīng)用前景。制備高活率的Sertoli不僅對(duì)Sertoli的基礎(chǔ)研究有重要價(jià)值，而且在精子發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。
|
組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
|
睪丸組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1622 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠睪丸支持細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠睪丸支持細(xì)胞經(jīng)Fas-L熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
EMAbELISAKit
大鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
CXCR4 ELISA Kit
人高香草酸(HVA)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HVAELISAKit
小鼠核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族(肝臟,嗜酸性粒細(xì)胞源性神經(jīng))(RNASE2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Annexin V-FITC / 7-AAD 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒20T
石蠟切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶TPX測(cè)試盒 100T/48樣 紫外比色法
組織相容性抗原DQB1抗體
HLA DQB1
膽汁酸鹽輸出泵重組兔單克隆抗體
ABCB11
大鼠(SS)elisa檢測(cè)試劑盒
植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
豚鼠環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)elisa檢測(cè)試劑盒
位素[γ32P]ATP激酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒
PSD95相關(guān)緊密連接蛋白PATJ抗體
PATJ
肌鈣集蛋白/收鈣素抗體
Calsequestrin
轉(zhuǎn)鐵蛋白/血清鐵傳遞蛋白抗體 Anti-Transferrin
神經(jīng)叢蛋白A1抗體 Anti-Plexin A1
多聚腺苷酸結(jié)合蛋白抗體 Anti-PABP
跨膜蛋白SEMA5A抗體 Anti-SEMA5A/Semaphorin 5A
Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgG H&L
大鼠睪丸支持細(xì)胞Mouse Anti-Goat IgG H&L / Cy7
鏈激酶抗體
Autoantigen RO; CALR; CALR protein; CALR_HUMAN; cC1qR; CRP55; CRTC; Endoplasmic reticulum resident protein 60; ERp60; grp60; HACBP; RO; Sicca syndrome antigen A; SSA.
大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞
豬乳腺成纖維細(xì)胞
A875人黑色素瘤細(xì)胞
95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。