細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠輸尿管上皮細(xì)胞分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對(duì)細(xì)長(zhǎng)的管道，呈扁圓柱狀，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個(gè)在越過(guò)小骨盆入口處；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu)，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段，也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動(dòng)脈處；盆段，自髂動(dòng)脈到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開(kāi)口。輸尿管管壁分為4層，黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成；外膜為疏松結(jié)締組織，營(yíng)養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中，輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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尿道組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1591 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸尿管上皮細(xì)胞采用先中性蛋白酶消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層、后膠原酶消化，并通過(guò)上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸尿管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)elisa分析檢測(cè)試劑盒
GMS10電擊感受態(tài)轉(zhuǎn)化試劑盒
小鼠泛素蛋白(Ub)elisa檢測(cè)試劑盒
銅Cu試劑盒 R：10ml×5 絡(luò)合比色法
HRP標(biāo)記一抗
電壓門控鈉通道SCN3α蛋白/Na+ CP type IIIα抗體 Anti-SCN3A
Rap2A抗體 Anti-Rap2A
神經(jīng)鈣傳感蛋白1抗體 Anti-NCS1/Frequenin
腫瘤/睪丸抗原12家族2抗體 Anti-XAGE2
膜相關(guān)環(huán)指蛋白5抗體 5-Mar
腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4抗體 CRMP4
FITC標(biāo)記人CD23單克隆抗體 human CD23/FITC
FLJ38767蛋白抗體 FLJ38767
血栓素合成酶抗體 Thromboxane synthase
液泡蛋白分選蛋白28抗體 VPS28
低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白抗體 MYLIP
端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體 TRF1
糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激酶1重組兔單克隆抗體 SGK1
酮基移換酶樣蛋白1抗體 TKTL1
RAS癌基因相關(guān)蛋白Rab6C抗體 RAB6C
RNA聚合酶II結(jié)合蛋白3抗體 RPAP3
40S核糖體蛋白S20抗體 RPS20
7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框59抗體 C7orf59
激肽釋放酶2抗體 KLK2
睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α抗體 CNTF Receptor alpha
細(xì)胞組織型纖維蛋白溶酶原激活劑（tPA）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
大鼠輸尿管上皮細(xì)胞大鼠血栓素合成酶(TXAS)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
乳糖待測(cè)樣品處理試劑盒
Alpha endosulfine; ARPP 19e; Endosulfine alpha; ENSA_HUMAN; Alpha-endosulfine; ARPP-19e.
大鼠胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞
小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞
BHK-21(C-13)倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞