產(chǎn)品名稱
人角膜上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
眼角膜組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
上皮細胞樣
分類
人原代細胞
貨號
A01X1470
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
人角膜上皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細胞層，外層即是上皮細胞；②角膜上皮細胞能參與先天性，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細胞能高效表達醛脫氫酶。角膜上皮細胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長因子和對細胞生長的影響。
方法簡介：
公司實驗室分離的人角膜上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的人角膜上皮細胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
GHRHELISAKit
鵝骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa分析檢測試劑盒
OT/BGP ELISA kit
人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgM)elisa分析檢測試劑盒
HumanherpessimplexvirusⅠ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)antibody(IgM)ELISAkit
蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物（含EDTA）1ml
βAMYLOID蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
小鼠白介素6受體(IL6R)elisa檢測試劑盒
大鼠5核苷酸酶(5-NT)elisa檢測試劑盒
電壓門控鉀通道亞基Kv7.5抗體
KCNQ5
尾側(cè)型源轉(zhuǎn)錄因子1抗體
CDX1
人Alpha-D 生育酚/維生素E(Alpha-D TPL)elisa檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬抑制劑2（TIMP-2）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠內(nèi)肽1(EM1)elisa檢測試劑盒
大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)elisa分析檢測試劑盒
環(huán)指蛋白87
RNF87
鋅指蛋白741抗體
KLF3/ZNF741
Smad蛋白E3泛素連接酶2抗體 Anti-SMURF2
胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A抗體 Anti-PTF1A
外周蛋白2抗體 Anti-PRPH2
泛素蛋白連接酶M抗體 Anti-UBE2M
膠體金標記的小鼠抗兔IgG H&L
人角膜上皮細胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / Gold
γ-內(nèi)啡肽抗體
Glutathione peroxidase 1; Cellular glutathione peroxidase; GPx 1; GPx-1; GPX1; GPX1_HUMAN; GSHPx-1; GSHPX1; MGC14399; MGC88245.
人結(jié)腸成纖維細胞
小鼠神經(jīng)干細胞
kyse30人食道癌細胞
CCD841 CON人正常結(jié)腸上皮細胞(有限細胞系）