培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
人結(jié)腸成纖維細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
結(jié)腸
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
分類
人原代細胞
貨號
A01X1294
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人結(jié)腸成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介：
人結(jié)腸成纖維細胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）。結(jié)腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結(jié)締組織內(nèi)。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的結(jié)腸成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
實驗室分離的人結(jié)腸成纖維細胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的人結(jié)腸成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）elisa檢測試劑盒
家蠶卵黃蛋白(LT)elisa檢測試劑盒
石蠟切片總游離菲律賓（FILIPIN）熒光間接染色試劑盒
小鼠活化蛋白C(APC)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)elisa分析檢測試劑盒
蛋白電泳預(yù)制膠15%，10孔 10塊/盒
βAMYLOID蛋白共沉淀分析試劑盒
小鼠白介素7(IL7)elisa檢測試劑盒
大鼠3-硝基(3-NT)elisa檢測試劑盒
鋅指蛋白224抗體 ZNF224
鋅指蛋白60抗體 Miz1/ZNF60
表皮生長因子受體底物8抗體 EPS8
叉頭蛋白O3A重組兔單克隆抗體 FOXO3A
DMXL2蛋白抗體 DMXL2
Dysfip1蛋白抗體 Dysferlin interacting protein 1
磷酸化非受體激酶c-Abl抗體 phospho-c-ABL (Tyr204)
磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體 phospho-PI 3 Kinase p110 delta (Tyr524)
轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 Transportin 1
組蛋白賴氨酸去甲基化酶PHF8抗體 PHF8
核酸內(nèi)切酶V抗體 Endov
黑色素瘤相關(guān)抗原D2抗體 MAGED2
ORC5L蛋白抗體 ORC5L
PE-Cy5標記人CD15單克隆抗體 human CD15 (SSEA-1)/PE-Cy5
誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白1抗體 GDAP1
雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體 DPF2
組蛋白H4-K20（mono/di/tri）甲基化檢測試劑盒
人結(jié)腸成纖維細胞小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)elisa檢測試劑盒
Cytolysin; FLH2; HPLH2; Lymphocyte pore forming protein; Lymphocyte pore-forming protein; MGC65093; P1; PERF_HUMAN; Perforin 1; Perforin 1 precursor; Perforin 1 preforming protein; Perforin-1; PFP; PGFL; PIGF; PIGF-2; PLGF; Pore forming protein; PRF 1; PRF1; SHGC-10760.
人結(jié)腸平滑肌細胞
小鼠舌表皮細胞
KYSE-410人食道鱗狀細胞癌
CCF-STTG1 人腦星形膠質(zhì)細胞瘤
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。