實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
|
脈絡(luò)膜組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1472 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
MouseomentinELISAKit
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa分析檢測(cè)試劑盒
PKC ELISA Kit
山羊β-脂蛋白(β-LP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
β-LPELISAKit
石蠟切片組織CREB蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
γ干擾素(IFNG)elisa檢測(cè)試劑盒
ATP-檸檬酸裂解酶（ACL）測(cè)試盒
小鼠核轉(zhuǎn)錄因子1(AP－1)elisa檢測(cè)試劑盒
睪酮(T)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Sea Lion Testosterone(T)ELISA kit
人膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanChATELISAKit
大鼠CC趨化因子受體9(CCR9)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠腦脊髓炎病毒(EV)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
細(xì)胞艾滋病毒1（HIV-1 PROTEASE）活性熒光淬滅法
肌球蛋白1B抗體
MYO1B
3號(hào)染色體開放閱讀框22抗體
C3orf22
谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶6抗體 Anti-TGase6/Transglutaminase 6
G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)因子14抗體 Anti-RGS14
老年性癡呆蛋白APH2抗體 Anti-Nicastrin
分泌素受體抗體 Anti-Secretin receptor
PE標(biāo)記的兔抗水IgG H&L
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞Rabbit Anti-Mink IgG H&L / PE
鞘脂激活蛋白樣蛋白1抗體
Telomerase Binding Protein，P23; Prostaglandin E synthase 3; Cytosolic prostaglandin E2 synthase; cPGES; Telomerase-binding protein p23; Hsp90 co-chaperone; Progesterone receptor complex p23; PTGES3; P23; TEBP; TEBP_HUMAN.
人毛囊干細(xì)胞
小鼠軟骨細(xì)胞
lovo人結(jié)直腸癌細(xì)胞
chang liver人宮頸癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。