實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
人腎小球系膜細胞分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾**原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細胞和系膜基質(zhì)組成。腎小球系膜細胞是腎小球內(nèi)非常活躍的細胞，具有分泌細胞基質(zhì)、產(chǎn)生細胞因子、吞噬和大分子物質(zhì)及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細胞的培養(yǎng)是研究系膜擴張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調(diào)節(jié)，以影響袢的內(nèi)壓和濾過率；②支持作用，它填充于袢之間，支持的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)；④分泌腎素，在腎缺血或復(fù)合物沉積時，系膜細胞增生且分泌腎素。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1329 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的人腎小球系膜細胞采用機械研磨法結(jié)合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的人腎小球系膜細胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
馬過氧化氫酶(CAT)elisa分析檢測試劑盒
附睪特異蛋白6抗體
LCN6
細胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1抗體
CPEB1
驢透明質(zhì)酸(HA)elisa檢測試劑盒
冰凍切片游離毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高氯酸萘醌（PAN）染色試劑盒
小鼠活化蛋白C(APC)elisa分析檢測試劑盒
大鼠胞外5'-核苷酸酶(NT5E)elisa檢測試劑盒
NK細胞受體2A抗體
NKG2A
糖蛋白磷脂酶D抗體
GPLD1
四聚體多肽蛋白21B抗體 Anti-TTC21B
磷酸化突觸后密度蛋白95抗體 Anti-Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240)
多胺調(diào)制因子結(jié)合蛋白1抗體 Anti-PMFBP1
突觸相關(guān)蛋白102抗體 Anti-SAP102/MPP3/DLG3
磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體
phospho-PIK3R1 (Tyr467)
嗅覺受體52I2抗體
OR52I2
Wnt1信號通路蛋白1抗體 Anti-WISP1
神經(jīng)元X連鎖蛋白/兒童自閉癥相關(guān)蛋白抗體 Anti-NLGN4X
軸突導(dǎo)向受體蛋白2抗體 Anti-Robo2
內(nèi)膜抗體 Anti-sFRP-4
大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)elisa分析檢測試劑盒
人腎小球系膜細胞IDS ELISA Kit
人環(huán)加氧酶2(COX-2)elisa分析檢測試劑盒
AIDA 1; AIDA-1; Amyloid-beta protein intracellular domain-associated protein 1; Anks1b; Ankyrin repeat and sterile alpha motif domain-containing protein 1B; ANS1B_HUMAN; E2A-PBX1-associated protein; EB-1.
人食管成纖維細胞
小鼠內(nèi)皮祖細胞
MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞
COLO320人結(jié)直腸腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。