實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
人牙髓干細(xì)胞分離自滑膜組織；牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi)。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似，牙冠部髓腔較大，稱髓室，牙根部髓腔較細(xì)小，稱根管，根尖部有小孔，稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經(jīng)、血管，和結(jié)締組織，還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細(xì)胞，其作用是造牙本質(zhì)。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機(jī)體抵抗力的差異，出現(xiàn)不同的病理變化，在臨床上會表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征。牙髓充血狀況持續(xù)時(shí)間較長后，轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
|
牙髓組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1467 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人牙髓干細(xì)胞采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人牙髓干細(xì)胞經(jīng)CD90熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
谷胺酰氨溶液（100X）
小鼠球蛋白G1(IgG1)elisa檢測試劑盒
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa檢測試劑盒
細(xì)胞半胱-3（CASPASE-3）活性比色法定量檢測試劑盒
人程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)elisa分析檢測試劑盒
細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物4-羥基壬烯醛（4－HNE）細(xì)胞流式分析試劑盒
丙酮酸（PA)含量測試盒
糖果環(huán)（cyclamate）含量薄層色譜法定性檢測試劑盒
小鼠補(bǔ)體成分5a受體1(C5aR1)elisa檢測試劑盒
突觸后密度蛋白95抗體 PSD95
微管蛋白抗體 beta Tubulin (Loading Control)
RSPRY1蛋白抗體 RSPRY1
SH3TC1蛋白抗體 SH3TC1
8號染色體開放閱讀框86抗體 C8orf86
AF647標(biāo)記的CD34單克隆抗體 CD34, Alexa Fluor 647 conjugated
鉀離子通道蛋白家族成員3抗體 KCNE3
角蛋白相關(guān)蛋白KAP3.2抗體 KAP3.2
乙?；M蛋白H2B (Lys12)抗體 Histone H2B (Acetyl K12)
硬纖毛蛋白STRC抗體 STRC
二氫嘧啶脫氫酶抗體 DPYD
防御素α1/3抗體 DEFA1/alpha Defensin 1
GRAMD4蛋白抗體 GRAMD4
G蛋白偶聯(lián)受體18抗體 GPR18
囊泡乙酰膽堿通道抗體 Vesicular Acetylcholine Transporter
嘌呤霉素敏感性氨肽酶蛋白抗體 NPEPPS
牛維生素C(VC)elisa分析檢測試劑盒
人牙髓干細(xì)胞C. albicans RFLP基因分析試劑盒
小鼠成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)elisa檢測試劑盒
epidermal growth factor receptor pathway substrate 15- ike 1; Epidermal growth factor receptor substrate 15 like 1; epidermal growth factor receptor substrate EPS15R; Eps15 related protein; eps15R;EP15R_HUMAN.
人牙齦成纖維細(xì)胞
小鼠口腔黏膜上皮細(xì)胞
NCI-h1688人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
CTX-TNA2大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。