
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開(kāi)背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開(kāi)腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門(mén)區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀(guān)察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開(kāi)始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見(jiàn)培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱(chēng)
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
主動(dòng)脈組織
生長(zhǎng)特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
分類(lèi)
人原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1275
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織;主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干。其運(yùn)行路徑為:升主動(dòng)脈起于左心室,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈;在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈,以上為胸主動(dòng)脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動(dòng)脈;髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在心血管發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用,以主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,探討心血管相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn);體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠肌微管素相關(guān)蛋白9(MTMR9)elisa檢測(cè)試劑盒
肝脂酶(HL)測(cè)試盒
通用型十字花科蔬菜黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.armoraciae; Xcarm)基因檢測(cè)試劑盒
動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
大鼠組胺(HIS)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠白介素25(IL25/C19orf10)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠 Klotho elisa分析檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞鈣鈉交換體(NCX)蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒
犬C反應(yīng)蛋白(CRP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
FGD4蛋白抗體 FGD4
FITC標(biāo)記小鼠CD90單克隆抗體 mouse CD90/FITC
磷脂酰肌醇激酶調(diào)節(jié)亞單位gamma重組兔單克隆抗體 PIK3R3
錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 ANKS6
蛋白偶聯(lián)受體56抗體 GPR56
凋亡抑制因子1抗體 cIAP1
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體 COPS6
選擇性剪接因子1抗體 SRSF1/SF2
RAN結(jié)合蛋白7抗體 RanBP7
RNA結(jié)合蛋白10抗體 RBM10
絲聚蛋白/中間絲相關(guān)蛋白抗體 Filaggrin
胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體 BPTF
基質(zhì)金屬蛋白酶3抗體 MMP3
甲胎蛋白AFP抗體 AFP
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框144抗體 C1orf144
3-氨基-2-惡唑烷酮單克隆抗體 3-AMINO-2-OXAZOLIDINONE
大鼠(NA)elisa檢測(cè)試劑盒
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞魚(yú)類(lèi)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白酶(MCT)elisa檢測(cè)試劑盒
UHRF1_HUMAN; E3 ubiquitin-protein ligase UHRF1; ICBP90; NP95; RNF106; TDRD22; hUHRF1; huNp95; EC:2.3.2.27; Inverted CCAAT box-binding protein of 90 kDa; Nuclear protein 95; Nuclear zinc finger protein Np95 (HuNp95; hNp95); RING finger protein 106; RING-type E3 ubiquitin transferase UHRF1; ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1;
人主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞
小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞
NCI-H522 人非小細(xì)胞肺癌腺癌細(xì)胞
DoTc2-4510人宮頸癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無(wú)菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。