實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
兔腎上腺皮質(zhì)細胞分離自腎上腺組織；腎上腺是機體相當(dāng)重要的器官，由于位于兩側(cè)腎臟的上方，故名腎上腺。腎上腺左右各一，位于腎的上方，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形，右腎上腺為三角形。從側(cè)面觀察，腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分，周圍部分是皮質(zhì)，內(nèi)部是髓質(zhì)。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分，分泌腎上腺素和。這些在應(yīng)激狀態(tài)釋放增多，能夠幫助升高血壓，加快心率，升高血糖，動員全身的儲備物質(zhì)，為機體與外界環(huán)境的抗爭作好充分準備。腎上腺外部是皮質(zhì)部分，分泌醛固酮、皮質(zhì)醇和少量的雌雄。醛固酮能夠促進小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收，正常數(shù)量的醛固酮，對維持機體正常血壓有重要作用。但是如果過多分泌，會導(dǎo)致高血壓和低血鉀。皮質(zhì)醇是機體必需的之一。當(dāng)機體處于應(yīng)激狀態(tài)時，比如感冒，發(fā)燒，遇到突發(fā)事件的時候，腎上腺皮質(zhì)分泌大量的皮質(zhì)醇，這些皮質(zhì)醇能夠動員機體的存儲能源，為應(yīng)對內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準備。當(dāng)皮質(zhì)醇缺乏時，機體在遇到重大事件的時候，往往缺乏足夠應(yīng)對能力，容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產(chǎn)生的雄，對雄性來講，并非，但是對雌性而言，是雄的一個重要來源。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎上腺 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2107 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腎上腺皮質(zhì)細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介：
實驗室分離的兔腎上腺皮質(zhì)細胞采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔腎上腺皮質(zhì)細胞經(jīng)3β-HSD熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3（NT-3）elisa檢測試劑盒
大鼠白介素12(IL-12/P70)elisa分析檢測試劑盒
小鼠三磷酸腺苷(ATP)elisa檢測試劑盒
人Igγ3鏈C區(qū)(IGHG3)elisa檢測試劑盒
細胞PAK2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
小鼠肌酐(Cr)elisa分析檢測試劑盒
大鼠補體C3a（C3a）elisa檢測試劑盒
石蠟切片脂肪酸費斯克勒（Fischler）直接染色試劑盒
人白介素19(IL-19)elisa檢測試劑盒
人巨細胞病毒單克隆抗體 HCMV(1F11)
溶質(zhì)載體家族25成員39抗體 SLC25A39
KCTD4蛋白抗體 KCTD4
LARP4B蛋白抗體 LARP4B/LARP5
整合素相關(guān)蛋白CD47重組兔單克隆抗體 CD47
中心體蛋白CEP120抗體 CEP120
甘氨酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 GNMT
干擾素調(diào)節(jié)因子7重組兔單克隆抗體 IRF7
細胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運源蛋白20抗體 IFT20
酰硫酯酶蛋白2抗體 LYPLA2
α-甘露糖苷酶2x抗體 MAN2A2
γ-銜接蛋白相關(guān)蛋白2抗體 GGA2
ATP依賴解螺旋酶ETL1抗體 SMARCAD1
B細胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子3抗體 PBX3
辣根過氧化物酶標記的小鼠抗Human IgE單克隆抗體 Anti-Human IgE / HRP
磷酸化S6核糖體蛋白(Ser240/244)抗體 Phospho-RPS6 (Ser240 + Ser244)
活體細胞組織L（CATHEPSIN L）活性原位熒光染色檢測試劑盒
兔腎上腺皮質(zhì)細胞內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)elisa檢測試劑盒
Bradford 蛋白定量試劑盒250T
Alzheimer disease amyloid associated protein; AMY; CLAC; CLAC P; CLAC precursor; COL25A1; COL25A1 protein; Collagen alpha 1 XXV chain; Collagen alpha 1(XXV) chain; Collagen like Alzheimer amyloid plaque component; Collagen like Alzheimer amyloid plaque component precursor; Collagen type XXV alpha 1; Collagenous Alzheimer amyloid plaque component.
兔腎小管上皮細胞
小鼠鼻腔粘膜上皮細胞
SW982 [SW-982]人滑膜肉瘤細胞
HCT116人結(jié)腸癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。