
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開(kāi)背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開(kāi)腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門(mén)區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開(kāi)始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見(jiàn)培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
視網(wǎng)膜
生長(zhǎng)特性
半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)
圓形
分類(lèi)
兔原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X2244
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織;視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺(jué)層組成,兩層間在病理情況下可分開(kāi),稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細(xì)胞組成,它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)。視網(wǎng)膜上的感覺(jué)層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層,專(zhuān)司感光,它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細(xì)胞,約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過(guò)雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,專(zhuān)管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來(lái)自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力強(qiáng)。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞經(jīng)Nestin熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
FASELISAKit
皮質(zhì)醇(Cortisol)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Whale Cortisol ELISA Kit
人蛋白ATP1B4(ATP1B4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanATP1B4ELISAKit
小鼠熱休克因子1(HSF1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠促腎上腺皮質(zhì)釋放因子(CRF)elisa檢測(cè)試劑盒
體液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
人并殖吸蟲(chóng)抗體(IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒
鉀通道相互作用蛋白2抗體
KChIP2
胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子抗體
CCL17
大鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)elisa檢測(cè)試劑盒
LEUCOCYTE ELASTASE
活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue1000T
LOWRY蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒
RMND5B蛋白抗體
RMND5B
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員1C抗體
KIF1C
斯鈣素抗體 Anti-Stanniocalcin 1
胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體 Anti-PSCDBP/CYTIP
溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體 Anti-PGT/Slco2a1
突觸囊泡融合蛋白Unc18-3抗體 Anti-Unc18-3
鏈霉親和素標(biāo)記山羊抗兔IgG H&L
兔視網(wǎng)膜前體細(xì)胞Goat Anti-Rabbit IgG H&L / Streptavidin
半乳糖凝集素2抗體
85 kDa calcium independent phospholipase A2; 85 kDa calcium-independent phospholipase A2; CaI PLA2; CaI-PLA2; CaIPLA2; Calcium independent phospholipase A2; Cytosolic calcium independent phospholipase A2; Group VI phospholipase A2; GVI; GVI PLA2; INAD1; iPLA(2)beta; iPLA2; IPLA2 VIA; iPLA2beta; NBIA2A; NBIA2B; PA2G6_HUMAN; PARK14; Patatin like phospholipase domain containing 9; Patatin like phospholipase domain containing protein 9; Phospholipase A2 calcium independent; Phospholipase A2 calcium independent group VI A; Phospholipase A2 group VI; Phospholipase A2 group VI cytosolic calcium independent; PLA2; PLA2G6; PNPLA9; PLPL9_HUMAN
兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
兔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞
THLE-2人正常肝細(xì)胞
HEB人腦膠質(zhì)細(xì)胞株;HEB人腦膠質(zhì)細(xì)胞株
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無(wú)菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。