細胞簡介：
兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細胞，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系，負責聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網(wǎng)膜血管的發(fā)病機制中有重要病理生理學(xué)意義。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細胞具有不同的特性，在腦和視網(wǎng)膜中，這些內(nèi)皮細胞具有內(nèi)屏障的功能，在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài)，釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用，體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性發(fā)展的病理生理機制以及的早期防治具有重要臨床意義。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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視網(wǎng)膜 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2224 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介：
實驗室分離的兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
水樣中汞離子（Hg2+）濃度測試盒
小鼠輔肌動蛋白α2(ACTN2)elisa檢測試劑盒
大鼠Klotho蛋白(KL)elisa檢測試劑盒
全組織組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測試劑盒（含AP二抗）
人c-jun elisa檢測試劑盒
小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)elisa檢測試劑盒
大鼠促腎上腺皮質(zhì)素釋放結(jié)合蛋白(CRHBP)elisa檢測試劑盒
血液一氧化氮（NO）活性比色法定量檢測試劑盒
人丙烯醛(ACR)elisa檢測試劑盒
6型膠原蛋白α5抗體 COL6A5
ADCK4蛋白抗體 ADCK4
甲狀腺受體α抗體 Thyroid hormone receptor alpha
堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子SCXA抗體 SCXA
RNA結(jié)合蛋白56抗體 TAF15/RBP56
SCN2A抗體 SCN2A
肽酰甘氨酸2羥化酶抗體 PAM/Peptidylglycine 2 hydroxylase
通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子抗體 ALF
GARNL3蛋白抗體 GARNL3
G蛋白偶合受體激酶2抗體 GRK2
鉬輔因子合成蛋白3抗體 MOCS3
內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體 ECE1
多型性腺瘤基因1蛋白抗體 PLAG1
泛素特異性蛋白酶52抗體 USP52/Pan2
血影蛋白A鏈非紅細胞型抗體 Spectrin alpha chain, non-erythrocytic 1
抑制素結(jié)合蛋白抗體 IGSF1
谷氨酸測試盒 50管/48樣 紫外比色法
兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞PARP蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
小鼠CD4分子(CD4)elisa分析檢測試劑盒
CLR19.4; FLJ94610; HYDM; NACHT, leucine rich repeat and PYD containing 7; NACHT, LRR and PYD containing protein 7; NACHT, LRR and PYD domains containing protein 7; NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 7; NALP7; NALP7_HUMAN; NLR family, pyrin domain containing 7; NLRP7; NOD12; Nucleotide-binding oligomerization domain protein 12; Nucleotide-binding oligomerization domain, leucine rich repeat and pyrin domain containing 7; PAN7; PYPAF3; PYRIN-containing APAF1-like protein 3.
兔視網(wǎng)膜微血管周細胞
兔主動脈內(nèi)皮細胞
TOV-112D人上皮性卵巢癌細胞
HEK-293（293）人胚腎細胞