
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產品名稱
小鼠腹腔巨噬細胞
產品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
腹腔液
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
巨噬細胞樣
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1586
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 巨噬細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液 利多卡因(12mM)
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
小鼠腹腔巨噬細胞分離自腹腔;腹腔,即軀干腹部的腔,內襯腹膜,由體壁、橫膈膜和盆底圍成,其內容納胃、肝、膽囊、脾臟、胰、腎臟、腸、闌尾、膀胱、泌尿系和婦科(、附件)等其他內臟器官。巨噬細胞屬細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞和分子學的重要對象。巨噬細胞較易獲得,便于培養(yǎng),并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養(yǎng),難以長期生存。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內的白血球,源自單核細胞,而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞,在脊椎動物體內參與非特異性防衛(wèi)(先天性)和特異性防衛(wèi)(細胞)。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化),并激活球或其他細胞,令其對病原體作出反應。巨噬細胞功能及其在發(fā)生過程中的作用是目前研究的熱點問題之一;腹腔巨噬細胞的吞噬、和分泌作用都十分活躍,有重要防御功能。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠腹腔巨噬細胞采用反復往腹腔注射培養(yǎng)基并抽取的方法結合差速貼壁制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠腹腔巨噬細胞經CD68熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品:
人白細胞調節(jié)素(LR)elisa分析檢測試劑盒
LHX3蛋白抗體
LHX3
腦組織表達X連鎖蛋白1抗體
Bex1
小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)elisa檢測試劑盒
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)elisa檢測試劑盒
組織CDK6/CYC D1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
人骨形成蛋白7(BMP7)elisa檢測試劑盒
NOC2家族樣蛋白抗體
NOC2L
9號染色體開放閱讀框135抗體
C9orf135
白細胞介素1受體銜接蛋白抗體 Anti-TIRAP
6磷酸果糖激酶2抗體 Anti-PFK2/PFKFB3
磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗體 Anti-PIK3 gamma
低密度脂蛋白受體相關蛋白9抗體 Anti-SorLA/LRP9
色氨酸2,3雙加氧酶抗體
TDO2/tryptophan 2,3-dioxyase
DPS1蛋白抗體
DPS1
WEE1蛋白抗體 Anti-WEE1 protein
核酪蛋白激酶和細胞周期蛋白依賴性激酶底物1抗體 Anti-NUCKS1
環(huán)指蛋白23抗體 Anti-RNF23
SLFNL1抗體 Anti-SLFNL1
大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)elisa分析檢測試劑盒
小鼠腹腔巨噬細胞BACE2 ELISA Kit
人黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)elisa分析檢測試劑盒
EPK 2; EPK2; EPK-2; nPKC nu; nPKCnu; nu; PKCnu; PKC nu; PKD 3; PKD3; PRK D3; PRKCN; PRKD 3; PRKD3; Protein kinase C; Protein kinase C nu; Protein kinase C nu type; Protein kinase D3; Protein kinase EPK 2; Protein kinase EPK2; Serine threonine protein kinase; Serine/threonine protein kinase D3.
小鼠肝竇內皮細胞
兔下丘腦神經元細胞
GC-2 SPd(ts)小鼠精母細胞系
Hs 414.T人纖維肉瘤細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。