細胞簡介：
小鼠結腸平滑肌細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi)。結腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑?。唤Y腸運動少而緩慢，對刺激的反應也較遲緩。結腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質分泌、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉導途徑等研究中起著重要的作用。結腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質、胃腸和等因素的調節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展，對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細胞、分子水平，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學等實驗。體外培養(yǎng)細胞，由于影響因素單一，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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結腸組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1810 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
CCR-6ELISAKit
組織相容性抗原DRB4抗體
HLA-DRB4
α/β水解酶4抗體
ABHD4
動物神經(jīng)組織細胞分離培養(yǎng)試劑盒
大鼠抗胰蛋白酶(AT)elisa分析檢測試劑盒
食物鎂離子濃度酶反應光譜法定量檢測試劑盒
山羊丙二醛(MDA)elisa分析檢測試劑盒
黑色素瘤相關抗原B2抗體
MAGEB2
16號染色體開放閱讀框48抗體
C16orf48
PSD95結合蛋白2抗體 Anti-SAPAP2/DLGAP2
RFESD蛋白抗體 Anti-RFESD
核仁和紡錘體相關蛋白1抗體 Anti-NUSAP1
X射線修復交叉互補蛋白4抗體 Anti-XRCC4
T細胞急性母細胞白血病相關抗原1抗體
TALLA-1
皮膚T細胞瘤相關抗原5抗體
CTAGE5
細胞外基質底物反應蛋白2抗體 Anti-SPON2/M spondin/Mindin
磷酸化蛋白激酶C抗體 Anti-phospho-PRKCA(Thr637)
凋亡相關蛋白4抗體 Anti-PDCD4
tRNA剪接內(nèi)切酶2抗體 Anti-TSEN2
PE標記豚鼠IgM
小鼠結腸平滑肌細胞Guinea pig IgM / PE
G蛋白偶聯(lián)受體GPR85蛋白抗體
Interleukin-12 receptor subunit beta-2; RP11-102M16.1; IL12 receptor beta 2; IL12R beta2; Interleukin 12 receptor beta 2; Interleukin 12 receptor beta 2 chain; RP11 102M16.1.
小鼠晶狀體上皮細胞
兔腎集合管上皮細胞
NG108-15小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質瘤之融合細胞
HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP