實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠卵泡膜細胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機能。卵巢是位于兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、管和神經(jīng)。哺乳動物的卵巢內(nèi)卵泡的發(fā)育需要相關(guān)的調(diào)節(jié)才能完成，垂體（卵泡刺和黃體**素）使原始卵泡開始發(fā)育，其過程中還產(chǎn)生大量的雌。雌是卵巢的顆粒細胞和卵泡膜細胞在垂體的作用下協(xié)同合成的，卵泡膜細胞合成的雄透過基膜進入顆粒細胞，并轉(zhuǎn)變?yōu)榇?。因此，卵泡膜細胞在生殖調(diào)節(jié)中占有關(guān)鍵的位置，了解其在病理及生理中的作用，對于與性有關(guān)的婦產(chǎn)科（如多囊卵巢綜合癥、卵巢癌等）的研究有著重要意義。在哺乳動物卵泡生長發(fā)育的過程中，卵母細胞由不斷增加的顆粒細胞層包裹。卵巢組織中的膜細胞作為卵泡的外層細胞可以維持卵泡結(jié)構(gòu)的完整性，參與構(gòu)成卵母細胞和顆粒細胞發(fā)育的微環(huán)境且為類固醇的**提供底物。在哺乳動物中調(diào)節(jié)膜細胞類固醇**的機制已見相關(guān)報道，但是有關(guān)卵泡膜細胞的聚集、生長和分化的研究尚不深入。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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卵巢組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1884 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠卵泡膜細胞采用先機械分離后膠原酶消化結(jié)合Percoll密度梯度離心法、并通過培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠卵泡膜細胞經(jīng)3β-HSD熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa檢測試劑盒免費代測
通用型羊弓形體剛地弓形蟲（Toxotest；Toxoplasma gondii）基因檢測試劑盒
小鼠D-乳酸elisa分析檢測試劑盒
大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)elisa檢測試劑盒
石蠟切片組織BAX蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)elisa檢測試劑盒
大鼠羥化酶(TH)elisa檢測試劑盒
體液乙酰酯酶活性熒光法定量檢測試劑盒
石斑魚卵黃蛋白原(VTG)elisa檢測試劑盒免費代測
源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子HESX1抗體 HESX1
唾液酸結(jié)合性球蛋白樣凝集素11抗體 SIGLEC11
RNA結(jié)合蛋白35A抗體 RBM35A/ESRP1
Schlafen 8蛋白抗體 Schlafen 8
6號染色體開放閱讀框93抗體 LTV1/C6orf93
ADAM17重組兔單克隆抗體 ADAM17 (9E7)
甲狀旁腺相關(guān)受體蛋白2抗體 PTH2R
堿性磷酸酶(腸型)抗體 ALPI
胰羧肽酶A1抗體 CPA1
抑癌蛋白AIMP3抗體 EEF1E1
多腺苷二磷酸多聚酶PARP9抗體 PARP9
泛素羧基末端水解酶2單克隆抗體 USP2
GALNT2蛋白抗體 GALNT2
G蛋白結(jié)合蛋白RAB6A抗體 RAB6A
莫洛尼白血病病毒10樣蛋白1抗體 MOV10L1
尿黑酸氧化酶抗體 HGD
豬前列腺素E2(PGE2)elisa檢測試劑盒
小鼠卵泡膜細胞大鼠粒細胞趨化蛋白2(GCP2)elisa檢測試劑盒
組織長鏈羥脂酰脫氫酶（HYDROXYACYL COA DEHYDROGENASE）活性比色法定量檢測試劑盒
Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3; ErbB-3; c erbB 3; c-erbB3; ErbB 3; cerbB3; ERBB3 protein; cerbB; 3erbB3 S; Glial growth factor receptor; HER 3; HER3; LCCS2; MDA BF 1; MGC88033; p180 ErbB3; p45 sErbB3; p85 sErbB3; proto-oncogene-; receptor tyrosine protein kinase ERB3 [precursor]; Receptor tyrosine protein kinase erbB 3; Receptor tyrosine protein kinase erbB3; Tyrosine kinase type cell surface receptor HER3; V erb b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3; v erb b2 erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3 (avian); v erb b2 erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3; ERBB3_HUMAN.
小鼠脈絡膜微血管內(nèi)皮細胞
兔神經(jīng)膠質(zhì)細胞
OP9小鼠骨髓基質(zhì)細胞
HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細胞（原代細胞永生化）
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。