實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
肌腱細(xì)胞是肌腱組織的基本功能單位，主要合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和糖蛋白基質(zhì)，維持肌腱組織的新陳代謝。
肌腱損傷后的方式包括內(nèi)源性和外源性，而理想的方式是控制外源性，促進(jìn)內(nèi)源性。內(nèi)源性的機(jī)制是肌腱細(xì)胞通過細(xì)胞自身的增殖從而促進(jìn)肌腱，但目前肌腱細(xì)胞在體外經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)后會(huì)喪失分裂增殖能力。
目前已知多種因素影響肌腱過程，其中與肌腱關(guān)系密切的有著重要調(diào)控作用的細(xì)胞因子主要有：堿性成纖維生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子 β，骨形態(tài)發(fā)生蛋白-12，血管內(nèi)皮生長因子，胰島素樣生長因子-1，血小板源性生長因子等。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
|
肌腱組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1677 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肌腱組織。
2) 細(xì)胞鑒定：Ⅰ型膠原熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代肌腱 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
ACTHELISAKit
環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
cAMP ELISA Kit
人單胺氧化酶(MAO)elisa分析檢測(cè)試劑盒
MAOELISAKit
人促胰液素/胰泌素(Secretin)elisa檢測(cè)試劑盒
單核細(xì)胞李斯特菌（Listeria monocytogenes）鑒定
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠皮質(zhì)酮(CORT)elisa檢測(cè)試劑盒
角蛋白相關(guān)蛋白KCP2抗體
KCP2
尾型源盒轉(zhuǎn)錄因子4抗體
CDX4
人EB病毒核抗原3A抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞CaM KII激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
小鼠趨化因子5(CCL5/RANTES)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠核受體亞家族3C組成員1(NR3C1)elisa檢測(cè)試劑盒
環(huán)指蛋白9抗體
RNF9
KLHL1蛋白抗體
KLHL1
解旋酶SNF2L抗體 Anti-SMARCA1/SNF2L
旁瘤抗原MA1抗體 Anti-PNMA1
多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體 Anti-PLAGL1/ZAC1
泛素結(jié)合酶E2O抗體 Anti-UBE2O/E2 230K
膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgM
大鼠肌腱細(xì)胞小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)elisa分析檢測(cè)試劑盒
猴白介素2(IL-2)elisa檢測(cè)試劑盒
CAHM1_HUMAN; Calcium homeostasis modulator 1; Calcium homeostasis modulator protein 1; CALHM1; FAM26C; Family with sequence similarity 26, member C; MGC39514; MGC39617; Protein FAM26C.
大鼠肌腱細(xì)胞
兔睪丸間質(zhì)細(xì)胞
CBRH7919大鼠肝癌細(xì)胞
Lu-143人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。