實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
甲狀旁腺是哺乳動(dòng)物體腺之一，有兩對(duì)，棕黃色，分別位于左右兩葉甲狀腺背面的中部和下部，其主要功能為分泌甲狀旁腺，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷的代謝。甲狀旁腺功能減退癥是指甲狀旁腺分泌減少或功能障礙的一種臨床綜合癥。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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甲狀旁腺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1619 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
細(xì)胞特性
1 ） 細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常甲狀旁腺組織。
2 ） 細(xì)胞鑒定： PTH 熒光染色為陽(yáng)性。
3 ） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于 90% 。
4 ） 不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、、酵母和。
5 ）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭形，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
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植物硝態(tài)氮測(cè)試盒
人N(ε)羧乙基賴(lài)氨酸(CEL)elisa分析檢測(cè)試劑盒
血液3－羥－3－甲戊二酰（HMG－COA）還原酶活性間接比色法
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa檢測(cè)試劑盒
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pYES＋目的基因
AF680標(biāo)記的衰變加速因子CD55抗體 CD55, Alexa Fluor 680 conjugated
AF750標(biāo)記的組織相容性復(fù)合體蛋白1抗體 HLA-C, Alexa Fluor 750 conjugated
緊密連接蛋白7抗體 CLDN7
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白138抗體 CCDC138
S-tag（標(biāo)簽）單克隆抗體 S-tag
TRIM50C蛋白抗體 TRIM50C
突觸相關(guān)蛋白25重組鼠單克隆抗體 SNAP25
微粒體谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶1抗體 MGST1
G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體 GNAO1
HS6ST2蛋白抗體 HS6ST2
凝血因子12重鏈抗體 Factor XIIa heavy chain
前列腺癌激活蛋白抗體 PDZK3
分泌載體膜蛋白4抗體 SCAMP4
富含脯氨酸的激酶2抗體 PYK2
乙型肝炎病毒X蛋白HBX抗體 Hepatitis B virus pre-X protein
載脂蛋白A5抗體 Apolipoprotein A V
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大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)elisa檢測(cè)試劑盒
70 kDa peroxisomal membrane protein; ABC 43; ABC D3; ABC43; ABCD 3; ABCD3 protein; ABCD3_HUMAN; ATP binding cassette sub family D (ALD) member 3; ATP binding cassette sub family D member 3; ATP-binding cassette sub-family D member 3; Peroxisomal membrane protein 1; PMP 70; PMP70; PXMP 1; PXMP1; ZWS2.
大鼠甲狀旁腺細(xì)胞
兔肝星狀細(xì)胞
CCD841 CON人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞(有限細(xì)胞系）
Lu-24人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。