實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
頸動脈存在于脊椎動物頸部的動脈。有頸外動脈和頸內(nèi)動脈，前者分布至頭頂部和顏面部，后者進入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。主動脈是由內(nèi)膜、中層彈力層和外膜構(gòu)成，三層緊密貼合在一起。其中，外膜層主要由成纖維細胞構(gòu)成。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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頸動脈組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1547 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1） 組織來源于實驗動物的正常頸動脈組織。
2) 細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代成纖維 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠骨形成蛋白6(BMP6)elisa檢測試劑盒
土壤總磷/有機磷/無機磷含量測試盒
通用型阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）基因檢測試劑盒
純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒
大鼠載脂蛋白H(Apo-H)elisa檢測試劑盒
Syndecan 3蛋白抗體 Anti-Syndecan 3
抵抗素抗體 Anti-Resistin
NFKB激活蛋白抗體 Anti-NKAP
受精卵抑制蛋白1樣蛋白抗體 Anti-ZAR1L
腫瘤壞死因子誘導蛋白2抗體 TNFAIP2
軸突蛋白4/少突膠質(zhì)細胞抗體 CASPR
睪丸特異性MLT5蛋白抗體 MLT5
骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體 BMP6
L-型電壓依賴型鈣通道α抗體 CACNA1C
mScarlet單克隆抗體 mScarlet
人水痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體 VZV gE
溶質(zhì)載體家族蛋白34成員A1抗體 SLC34A1
CD2結(jié)合蛋白3抗體 CD2BP3
COX4NB蛋白抗體 COX4NB
磷酸化6丙酮酰四氫蝶呤合成酶PTPS抗體 phospho-PTS (Ser19)
磷酸化Src原癌基因重組兔單克隆抗體 phospho-Src (Tyr419)
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白8抗體 TTC8
半胱氨酸蛋白酶抗體 Legumain
細胞質(zhì)FMR1相關(guān)蛋白抗體 CYFIP1
心動加速蛋白多肽抗體 CCAP
大鼠抗凝血酶III(AT III)elisa分析檢測試劑盒
大鼠頸動脈成纖維細胞γ-GCS ELISA kit
人琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)elisa分析檢測試劑盒
β-Amyloid 1-40; beta Amyloid(1-40); beta-Amyloid 1-40; beta-Amyloid 1-40; Amyloid 1-40; A4; AAA; ABETA; ABPP; AD1; Alzheimers Disease Amyloid Protein; Amyloid B; Amyloid Beta A4 Protein Precursor; Amyloid Beta; Amyloid of Aging and Alzheimer Disease; APP; APPI; B Amyloid; Beta APP; Cerebral Vascular Amyloid Peptide; CTFgamma; CVAP; PN II; PN2; PreA4; Protease nexin II; A beta; A4_HUMAN.
大鼠頸動脈成纖維細胞
兔腹腔主動脈平滑肌細胞
EJ-1[EJ1]人膀胱癌細胞
MA-891小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。