實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
血管發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞（ smooth muscle cells, SMCs）轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌細(xì)胞能表達(dá)鈣離子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)可能是造成血管壁炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步造成血管的原因。因此，對血管平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管的靶向方法。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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主動脈組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1709 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常主動脈組織。
2） 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5） 細(xì)胞生長方式：長梭形、不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 平滑肌 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa分析檢測試劑盒
人L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa檢測試劑盒
血液尿激酶（UROKINASE）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)elisa分析檢測試劑盒
大鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽elisa分析檢測試劑盒
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)elisa檢測試劑盒
動物硬組織線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒
雙酚A(BPA)elisa檢測試劑盒
通用型雞傳染性法氏囊?。?span>Infectious Bursal Disease/Gumboro Disease；IBD）基因檢測試劑盒
嗅覺受體52E2抗體 OR52E2
血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體 Heme Oxygenase 1
蛋白激酶C nu型抗體 PRKD3
蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1A抗體 PPP2R1A
FAM59A蛋白抗體 FAM59A
FITC標(biāo)記人CD103 (ITGAE)單克隆抗體 human CD103 (ITGAE)/FITC
磷酸化周期素B1抗體 Phospho-Cyclin B1 (Ser126)
磷酯酶Cβ2抗體 Phospholipase C beta 2
20號染色體開放閱讀框103抗體 C20orf103
3號染色體開放閱讀框39抗體 C3orf39
肌球蛋白2抗體 Myosin heavy chain 2
激活STAT蛋白抑制因子1抗體 PIAS1
PRDM10抗體 PRDM10
RASSF10蛋白抗體 RASSF10
絲氨酸/蘇氨酸SFRS9抗體 SFRS9
糖原蛋白2抗體 GYG2
大鼠CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)elisa分析檢測試劑盒
大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞BMP-7 ELISA Kit
兔6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)elisa分析檢測試劑盒
MEPI; Myoepithelium derived serine protease inhibitor; Pancpin; Pancreas specific protein TSA2004; Peptidase inhibitor 14; PI 14; PI14; Protease inhibitor 14; Serine (or cysteine) proteinase inhibitor clade I (neuroserpin) member 2; Serine (or cysteine) proteinase inhibitor clade I (pancpin) member 2; Serpin I2; Serpin peptidase inhibitor clade I (pancpin) member 2; TSA2004; SPI2_HUMAN; SERPINI2.
大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞
兔肺成纖維細(xì)胞
HET-1A人食管上皮細(xì)胞
MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。