實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞（Treg）是具有調(diào)節(jié)活性的T細(xì)胞亞群，在維持機(jī)體的耐受以及調(diào)控應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。
Treg細(xì)胞通過其表面表達(dá)一致性分子，分泌抑炎性細(xì)胞因子，直接發(fā)揮細(xì)胞毒作用以及改變抗原呈遞細(xì)胞的抗原提呈功能而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞屬于CD4+T細(xì)胞亞群，占正常人外周血及脾臟組織中的CD4+T細(xì)胞的5%-10%。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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外周血。 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1462 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于外周血。
2）細(xì)胞鑒定：CD4和CD25熒光染色為陽性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長方式：懸浮培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代 T細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
石蠟切片組織PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒
大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)elisa檢測試劑盒
體液HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病毒定性檢測試劑盒
豚鼠白介素5(IL5)elisa檢測試劑盒
轉(zhuǎn)化生長因子β1抗體 Anti-TGF Beta 1/2/3
核糖核酸酶抑制因子1抗體 Anti-Ribonuclease Inhibitor
神經(jīng)激肽B抗體 Anti-NKB
血管活性腸肽受體-1抗體 Anti-VIP Receptor 1/VAPC1
腺苷A1A受體抗體 ADORA1
心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體 Corin
白介素31受體a抗體 IL31RA
胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 Anillin
CD5抗體 CD5
C端結(jié)合蛋白1抗體 CTBP1
磷酸化FANCD2抗體 phospho-FANCD2 (Ser222)
磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體 Phospho-FoxO1 (Ser319)
豬胃蛋白酶抗體 Pepsin A
轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體 LMCD1
光導(dǎo)蛋白樣蛋白PDCL抗體 PHLP
核呼吸因子-1抗體 NRF1
myc蛋白抗體 Myc
NMDA受體調(diào)節(jié)1樣蛋白抗體 NARG1L
溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族35成員D3抗體 SLC35D3
神經(jīng)細(xì)胞PAS結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 NPAS2
人蛋白磷酸酶1B(PTP1B)elisa分析檢測試劑盒
人Treg細(xì)胞尼氏染色試劑盒(焦油紫法)2×100ml
大鼠髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(TREM1)elisa檢測試劑盒
Laminin alpha 3; LAMNA; Laminin subunit alpha-3; Laminin-5 subunit alpha; Laminin 5 alpha 3; Laminin-6 subunit alpha; Laminin-7 subunit alpha; Epiligrin 170 kDa subunit; E170; Epiligrin subunit alpha; Kalinin subunit alpha; Nicein subunit alpha, BM600; LOCS; LAMA3_HUMAN.
人Treg細(xì)胞
人小腸成纖維細(xì)胞
BPH-1(前列腺增生細(xì)胞)
MUTZ-8人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。