實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
附睪是一個(gè)多數(shù)曲折、細(xì)小的管子構(gòu)成的器官，一面連接著輸精管，一面連接著睪丸的曲細(xì)精管。當(dāng)精子離開睪丸時(shí)，就跑到附睪里，繼續(xù)生長(zhǎng)成熟。附睪管除貯存精子外還能分泌附睪液，其中含有某些、酶和特異的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它們有助于精子的成熟。附睪管由黏膜、肌層和外膜組成。其中，粘膜層主要是由粘膜上皮細(xì)胞構(gòu)成。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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附睪組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1382 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于人的正常附睪組織。
2)細(xì)胞鑒定：PCK熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：鋪路石樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠谷氨酸半胱氨酸連接酶(GCLM)elisa檢測(cè)試劑盒
組蛋白H3-K18（mono）甲基化檢測(cè)試劑盒
小鼠甘油三酯(TG)elisa檢測(cè)試劑盒
雞甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa分析檢測(cè)試劑盒
體液總脂蛋白（Total L-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
SEL1L抗體 Anti-SEL1L
環(huán)指蛋白166抗體 Anti-RNF166
間變性瘤激酶核相互作用伴侶蛋白抗體 Anti-NIPA
糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體 Anti-WBSCR14/ChREBP
鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體 ATPase Na+/ K+ beta 2
內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體 PAI1
FITC標(biāo)記人TCR α/β單克隆抗體 human TCR α/β/FITC
FUT4單克隆抗體 FUT4
亞硫酸鹽氧化酶抗體 Sulfite oxidase
胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白2抗體 IGF2BP2
電壓門控性鉀通道Kv2.2抗體 Kv2.2
多聚腺苷酸結(jié)合蛋白4抗體 PABPC4
通用轉(zhuǎn)錄因子2H亞基2C抗體 GTF2H2C
突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體 Tomosyn/STXBP5
RecQ解旋酶樣蛋白5抗體 RECQL5
S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體 S100A11
5-羥色胺受體3A抗體 5HT3A Receptor
9號(hào)染色體開放閱讀框173抗體 C9orf173
甲基化CpG結(jié)合蛋白MBD6抗體 MBD6
腈水解酶1抗體 NIT1
頂體形態(tài)豌豆凝集素?zé)晒鈽?biāo)記（PSA-FITC）染色試劑盒
人附睪管上皮細(xì)胞Rabbit Anti-human IgG heavy chain constant region whole serum
γ-谷氨酰基環(huán)轉(zhuǎn)移酶抗體
RGC32; Chromosome 13 open reading frame 15; KIAA0564; MGC87338; response gene to complement 32; Response gene to complement 32 protein; RGC 32; RGCC_HUMAN.
人附睪管上皮細(xì)胞
人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞；IMR-90
NCI-H1672 [H1672] 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。