實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟對來自體內(nèi)和體外的許多非營養(yǎng)性物質(zhì)如各種、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物，具有生物轉(zhuǎn)化作用。通過新陳代謝將它們分解或以原形排出體外。在肝中及外圍有部分結(jié)締組織，這些結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞組成。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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肝臟組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1304 |
僅供科研研究實驗 |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于人正常肝臟組織。
2)細(xì)胞鑒定：Vimentin熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：長梭狀，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Rabbiths-CRPELISAKit
IGF2基因的互補基因1蛋白抗體
IGF2AS
蛋白激酶錨定蛋白13抗體
AKAP13
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SRPK7抗體 Anti-SFRS7/9G8/SRp20
環(huán)指蛋白186抗體 Anti-RNF186
神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)蛋白1抗體 Anti-NEDD1
鋅指蛋白449抗體 Anti-ZNF449
平滑肌細(xì)胞相關(guān)蛋白4抗體
MFSD1
1號染色體開放閱讀框177抗體
C1orf177
T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體 Anti-TFEB
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白4抗體 Anti-RIMS4
類固醇受體激活蛋白2抗體 Anti-NCOA2/KAT13C/GRIP1
T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體 Anti-VSIG4
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體
TRAF7
支鏈α-酮酸脫氫酶E2抗體
DBT
肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體 Anti-SMARCD3
跨膜蛋白Orai2抗體 Anti-Orai2
磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體 Anti-phospho-PAK1/2/3(Thr423)
血小板**素受體抗體 Anti-TPOR/CD110/C-MPL
膠體金標(biāo)記的正常兔IgG
人肝成纖維細(xì)胞大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)elisa分析檢測試劑盒
RyR受體蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒
ADP ribosyltransferase 4 (DO blood group); ADP ribosyltransferase 4 (Dombrock blood group); ADP ribosyltransferase 4; ART 4; CD297; CD297 antigen; DO; DOK1; Dombrock blood group carrier molecule; Ecto ADP ribosyltransferase 4; Mono ADP ribosyltransferase 4; Mono(ADP ribosyl)transferase 4; NAD(P)(+) arginine ADP ribosyltransferase 4.
人肝成纖維細(xì)胞
人食管成纖維細(xì)胞
HUV-EC-C [HUVEC]（人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞）
NCI-H1703人肺癌細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。