實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
頸位于下部，近似圓錐體，長 2.5～75px，上端與體相連，下端深入。宮頸的大小與宮體比例隨年齡及狀態(tài)等而變化。宮頸壁由黏膜、肌層和外膜組成。其中，外膜是由成纖維細胞構(gòu)成。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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**組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1374 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于人正常組織。
2)細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
IFI16/p16ELISAKit
魚白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒
LT-B4 ELISA Kit
人丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa分析檢測試劑盒
HumanmalonylcoenzymeAELISAKit
細胞周期蛋白SG2N抗體 Anti-Striatin 3/SG2NA
環(huán)指蛋白213 Anti-RNF213
神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體 Anti-NECAB1/EF-CBP1
DNA補充修復XPC細胞蛋白抗體 Anti-XPC
脂多糖結(jié)合蛋白抗體
LBP
卵黃狀黃斑病蛋白2抗體
Bestrophin 2
短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體 Anti-SCHAD/HADHSC
磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 Anti-Phospho-RSK2 (Ser227)
利鈉肽受體C抗體 Anti-NPRC/Natriuretic Peptide Receptor C
磷酸化ZCWCC1抗體 Anti-phospho-ZCWCC1 (Ser739)
SH3結(jié)構(gòu)域激酶結(jié)合蛋白1抗體
SH3KBP1
COBL蛋白抗體
Cordon bleu homolog
跨膜蛋白SEMA4A抗體 Anti-SEMA4A
孤兒核受體PAR1抗體 Anti-PXR
腦特異性多肽蛋白19抗體 Anti-PCP4/PEP-19
TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 Anti-TNIK
兔抗馬IgG抗血清
人宮頸成纖維細胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / Cy5
牛磺酸/β-氨基乙磺酸抗體
NR2C2_HUMAN; Nuclear hormone receptor TR4; Nuclear receptor subfamily 2 group C member 2; Orphan nuclear receptor TAK1; Orphan nuclear receptor TR4; TAK1; Testicular nuclear receptor 4; Testicular receptor 4; TR2R1; TR4; TR4 nuclear hormone receptor.
人宮頸成纖維細胞
人腎上腺包膜成纖維細胞
人涎腺腺樣囊性癌細胞；ACC-3 (STR)
NCI-H1944人非小細胞肺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。