實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
頰黏膜位于上、下牙的咬合部位，是口腔黏膜的一個(gè)特定區(qū)，通常為口腔和上喉分泌保濕劑和潤滑劑。
頰粘膜的組織結(jié)構(gòu)與唇黏膜相似，固有層結(jié)締組織致密，黏膜下層較厚。頰粘膜通過黏膜下層附著再頰肌上，具有一定張力，在咀嚼肌肥大和黏膜增厚的情況下，頰白線增厚，彌漫性水腫和腫脹，有時(shí)變紅，延伸至近牙齒。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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頰黏膜組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1486 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于人正常頰黏膜組織。
2)細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：長梭形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf原代 成纖維 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)elisa檢測試劑盒
小鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)elisa分析檢測試劑盒
特定微型RNA目標(biāo)基因探測技術(shù)試劑盒
組織ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒
MEM培養(yǎng)基 500ml
小鼠FMS樣激酶3(Flt3)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
肌酐酶 10 KU/瓶
石蠟切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）測試盒
FRMPD2抗體 FRMPD2
G氨基丁酸A型受體α2/GABAA Rα2抗體 GABRA2
膜突蛋白重組兔單克隆抗體 Moesin
腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制相關(guān)蛋白1抗體 GLIPR1
多功能DNA修復(fù)酶抗體 APEX1
泛素蛋白連接酶C抗體 UBE2C
血清淀粉樣蛋白A單克隆抗體 Human SAA1
野生型P53誘導(dǎo)基因1抗體 PAG608
RYK單克隆抗體 RYK
SHISA3蛋白抗體 SHISA3
糖基轉(zhuǎn)移酶GLT8D2抗體 GLT8D2
銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 COMMD10
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 KCTD8
酵母肌動(dòng)蛋白（內(nèi)參）抗體 Beta Actin (Yeast, Loading Control)
3-磷酸甘油醛脫氫酶 GAPDH
9號(hào)染色體開放閱讀框135抗體 C9orf135
大鼠微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)elisa檢測試劑盒
人頰黏膜成纖維細(xì)胞大鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt)elisa檢測試劑盒
細(xì)胞腺苷酸環(huán)化酶（Adenylate Cyclase）活性熒光定量檢測試劑盒
BPI fold containing family B, member 1; long palate, lung and nasal epithelium carcinoma associated 1 isoform 1; chromosome 20 open reading frame 114; C20orf114; Long palate; BPIB1_HUMAN; Lplunc1; lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 1; VEMSGP; Von Ebner minor salivary gland protein; MGC14597; MGC156708; RGD1563047; RP23-154J12.1; U46068.
人頰黏膜成纖維細(xì)胞
人前列腺上皮細(xì)胞
人滑膜肉瘤細(xì)胞； SW 982 (STR)
NCI-H2126 人肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。