實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第 3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母M，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。
結(jié)腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導(dǎo)致結(jié)腸癌，是常見的惡性腫瘤之一。因此，體外培養(yǎng)結(jié)腸黏膜上皮細胞為研究進一步結(jié)腸癌等提供了前提和基礎(chǔ)。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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結(jié)腸組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1323 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1） 細胞來源于人正常結(jié)腸組織。
2) 細胞鑒定：PCK熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細胞生長方式：多角形，鋪路石樣細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
BSPELISAkit
倉鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa分析檢測試劑盒
TNF-α ELISA kit
人對氧磷酶-3(PON3)elisa分析檢測試劑盒
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DHPR受體蛋白表達西方雜交分析試劑盒
雞白血病抑制因子(LIF)elisa分析檢測試劑盒
通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒
小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)elisa分析檢測試劑盒
磷酸肌醇磷酸酶蛋白INPP5抗體
INPP5F
4號染色體開放閱讀款
C4orf45
細胞GRK4激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人干擾素誘導(dǎo)T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)elisa檢測試劑盒
大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)elisa檢測試劑盒
植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)elisa檢測試劑盒免費代測
胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體
PSCDBP
A型流感病毒PB1-F2抗體
Influenza A PB1-F2
泛素蛋白連接酶J2抗體 Anti-UBE2J2
轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體 Anti-PAX6
核糖核酸結(jié)合蛋白2抗體 Anti-PTBP2
特異性解旋酶抗體 Anti-SMARCA6/HELLS
PE-CY5標記的驢抗人IgG H&L
人結(jié)腸上皮細胞BACE1 ELISA Kit
人黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)elisa分析檢測試劑盒
Calcium and DAG-regulated guanine nucleotide exchange factor II; CALDAG-GEFI; CALDAG-GEFII; Guanine nucleotide exchange factor, calcium and DAG regulated, Rap1A; hRasGRP1; Ras activator RasGRP; RAS guanyl nucleotide releasing protein 1; RAS guanyl releasing protein 1 (calcium and DAG-regulated); RAS guanyl releasing protein 1; RASGRP; RASGRP1; GRP1_HUMAN.
人結(jié)腸上皮細胞
人臍動脈平滑肌細胞
人甲狀腺癌細胞；K1 (STR)
NCI-H226人間皮瘤細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。