實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
膀胱癌是一種泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率和死亡率較高，膀胱癌分為非肌浸潤(rùn)性膀胱癌與肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌。
腫瘤微環(huán)境理論認(rèn)為，腫瘤微環(huán)境與細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤對(duì)化療反應(yīng)的重要決定因素。腫瘤微環(huán)境包括和非細(xì)胞，以及細(xì)胞外成分，在腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。其中，非細(xì)胞主要由腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞構(gòu)成。
成纖維細(xì)胞是實(shí)體瘤中主要的細(xì)胞，它們結(jié)合結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)，是組織結(jié)構(gòu)完整性的基礎(chǔ)。已有研究表明，腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞是腫瘤演進(jìn)的重要促進(jìn)劑，它們可通過(guò)分泌一種或多種可溶性因子如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、趨化因子和基質(zhì)降解酶等
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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膀胱癌組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1342 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于手術(shù)切除的膀胱癌組織。
2)細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠α2-HS糖蛋白(AHSG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
肉類（folic acid）含量比色法定量檢測(cè)試劑盒
小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞MYC蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒
冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS）測(cè)試盒
總微型RNA（miRNA）電泳法分離試劑盒
小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)elisa分析檢測(cè)試劑盒
突觸結(jié)合蛋白10抗體 Synaptotagmin X
微管蛋白特定伴侶蛋白E抗體 TBCE
RTCD1蛋白抗體 RTCD1
SH3YL1蛋白抗體 SH3YL1
8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框K29抗體 C8orfK29
AF647標(biāo)記的P選擇素糖蛋白配體1抗體 PSGL-1/CD162, Alexa Fluor 647
鉀離子通道蛋白家族成員4抗體 KCNE4
角蛋白相關(guān)蛋白KAP3.3抗體 KAP3.3
乙?；M蛋白H2B (Lys12)鼠單克隆抗體 Histone H2B (Acetyl K12)
硬脂酰輔酶A去飽和酶5抗體 SCD5
二氫乳清酸脫氫酶抗體 DHODH
防御素α4抗體 Neutrophil defensin 4
GRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 GRAMD2
G蛋白偶聯(lián)受體19/GPCR GPR4抗體 GPR19/GPR4
囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC20 抗體 BNIP1
盤(pán)狀結(jié)構(gòu)域受體蛋白2單克隆抗體 DDR2/CD167b
動(dòng)物乳腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒
人膀胱癌相關(guān)成纖維細(xì)胞Rabbit Anti-Avidin / Cy5
CD39樣蛋白2/ENTPD6抗體
GKAP/SAPAP interacting protein; SH3 and multiple ankyrin repeat domains 1; SH3 and multiple ankyrin repeat domains protein 1; SHANK-1; SPANK 1; Somatostatin receptor interacting protein; Somatostatin receptor-interacting protein; SH3 and multiple ankyrin repeat domains protein 1; SSTR-interacting protein; SPANK1; SSTR interacting protein; SSTRIP; SHAN1_HUMAN; Synamon.
人膀胱癌相關(guān)成纖維細(xì)胞
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞；3AO
NCI-H524人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。