培養(yǎng)方法與步驟：
①動(dòng)物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開(kāi)背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開(kāi)腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門(mén)區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí)，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁，并開(kāi)始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可見(jiàn)培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色，此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞，這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
人脾成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
脾臟組織
生長(zhǎng)特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
長(zhǎng)梭形細(xì)胞
分類(lèi)
人原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1454
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于人正常脾臟組織。
2)細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
脾是重要的器官，有造血、濾血、衰老血細(xì)胞及參與反應(yīng)等功能。也是細(xì)胞遷移和接受抗原刺激后發(fā)生應(yīng)到、產(chǎn)生效應(yīng)分子的重要場(chǎng)所。脾由被膜、小梁、白髓、紅髓、邊緣區(qū)幾部分組成。其中的結(jié)締組織主要是由成纖維洗白構(gòu)成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人B7-H4 elisa分析檢測(cè)試劑盒
20％中性Formalin固著液
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
咖啡阿斯巴塘（aspartame）含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒
超氧化物歧化酶（SOD）酵母/裂解樣品制備試劑盒
水蘇糖含量測(cè)試盒
絲氨酸蛋白酶37抗體 Protease serine 37
髓磷酯髓鞘蛋白1單克隆抗體 PLP1
PE標(biāo)記人CD4單克隆抗體 Human CD4-PE
PSF2蛋白抗體 PSF2
19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框44抗體 C19orf44
20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體 C20orf26
磺基轉(zhuǎn)移酶抗體1C2抗體 SULT1C2
肌球蛋白重鏈9抗體 MYH9
嗅覺(jué)受體52E1抗體 OR52E1
血紅素抗體 Hemoglobin
蛋白激酶C mu型抗體 PRKD1/PKC mu
蛋白質(zhì)磷酸酶2A亞基3抗體 PPP2R3
FAM58A蛋白抗體 FAM58A
FITC標(biāo)記人/小鼠ZAP-70單克隆抗體 human/mouse ZAP-70/FITC
磷酸化周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體 Phospho-p57 Kip2 (Thr310)
卵母細(xì)胞TRO抗體 Magphinin
汞離子檢測(cè)試劑盒
人脾成纖維細(xì)胞小鼠CC趨化因子受體6(CCR-6)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠腺苷受體A2a(ADORA2A)elisa檢測(cè)試劑盒
B220; CD 45; CD45; cd45 antigen; ec3.1.3.48; CD45R; GP180; GP180; GP 180; L CA; LCA; L-CA; Leukocyte common antigen; LY5; Protein tyrosine phosphatase receptor type C; Protein tyrosine phosphatase receptor type c polypeptide; protein tyrosine phosphatase, receptor type, C; Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C; PTPRC; PTPRC_HUMAN; SCID due to PTPRC deficiency; T200; T200 glycoprotein; T200 leukocyte common antigen; Human homolog of severe combined immunodeficiency due to PTPRC deficiency.
人脾成纖維細(xì)胞
人毛囊干細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞；HepAD38
NCI-H929人骨髓瘤細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。