
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
人髓核細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
脊髓組織
生長(zhǎng)特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
長(zhǎng)梭形細(xì)胞
分類
人原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1413
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性:
1)組織來(lái)源于正常脊髓組織。
2)細(xì)胞鑒定:Ⅱ型膠原熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:長(zhǎng)梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代 軟骨 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)原代腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
髓核,是乳白色半透明膠狀體,富于彈性,為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分,位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。
發(fā)育成熟的髓核是一個(gè)由軟骨樣細(xì)胞分散在細(xì)胞間質(zhì)內(nèi),周圍圍繞著一個(gè)比較致密的膠原纖維網(wǎng)的含水球,位于椎間盤偏后位置,占推間盤橫斷面積的 50%~60%;由于它的含水量很高,并和軟骨終板緊密接觸,是椎間盤接受經(jīng)軟骨終板主要營(yíng)養(yǎng)途徑滲透交換營(yíng)養(yǎng)的主要部分。
下腰痛是臨床常見病,其病因主要是椎間盤退變所致。椎間盤退變的主要機(jī)制首先是椎間盤內(nèi)髓核細(xì)胞逐漸衰
公司正在出售的產(chǎn)品:
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CD85e抗體
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順氯氨鉑耐藥相關(guān)蛋白9抗體
CRR9
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磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 Anti-Phospho-SATB1 (Ser47)
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人髓核細(xì)胞Horse IgM / RBITC
鋅指蛋白880抗體
Epididymis luminal protein 117; Epididymis secretory protein Li 53; HEL 117; HEL S 53; NDGOA; Neuron cytoplasmic protein 9.5; OTTHUMP00000218137; OTTHUMP00000218139; OTTHUMP00000218140; OTTHUMP00000218141; Park 5; PARK5; PGP 9.5; PGP9.5; PGP95; Protein gene product 9.5; Ubiquitin C terminal esterase L1; Ubiquitin C terminal hydrolase; Ubiquitin C terminal hydrolase L1; Ubiquitin carboxyl terminal esterase L1; Ubiquitin carboxyl terminal hydrolase isozyme L1; Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1; Ubiquitin thioesterase L1; Ubiquitin thiolesterase; Ubiquitin thiolesterase L1; UCH-L1; UCHL1; UCHL1_HUMAN.
人髓核細(xì)胞
人脊柱炎髖關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞
HEB人腦膠質(zhì)細(xì)胞株;HEB人腦膠質(zhì)細(xì)胞株
P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無(wú)菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。