實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
胰腺分為外分泌腺和腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。
腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán) -胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：胰島能分泌胰島素與胰高血糖素等。人類的胰島細(xì)胞按其染色和形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，主要分為α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞約占胰島細(xì)胞的20%，分泌胰高血糖素；β細(xì)胞占胰島細(xì)胞的60%-70%，分泌胰島素；γ細(xì)胞占胰島細(xì)胞的10%，分泌；PP細(xì)胞數(shù)量很少，分泌
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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胰腺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1346 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 細(xì)胞來(lái)源于人正常胰腺組織。
2) 細(xì)胞鑒定：雙硫腙（DTZ）化學(xué)染色染色為陽(yáng)性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：島狀成團(tuán)生長(zhǎng)，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代上皮細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)elisa檢測(cè)試劑盒
E3泛素蛋白連接酶MIB1抗體
Mib1
鴨甲型肝炎病毒聚蛋白/鴨肝炎病毒抗體
Duck hepatitis A virus polyprotein
CREB蛋白共沉淀分析試劑盒
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒100T
食物甘素（dulcin）含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒
小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa檢測(cè)試劑盒
磷脂酰肌醇-5-磷酸鹽-4激酶2型α抗體
PIP4K2A
熱休克蛋白70樣蛋白抗體
HSPA1L
四分子交聯(lián)體15抗體（四旋蛋白） Anti-TSPAN15/NET-7
磷酸化蛋白酶體PSMα3抗體 Anti-Proteasome 20S alpha 3(Ser250)
橋粒斑菲素蛋白1抗體 Anti-Plakophilin 1
泛素結(jié)合蛋白P62抗體 Anti-SQSTM1/p62
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgA
Rabbit Anti-Human IgA / PE-Cy5.5
磷酸化高遷移率核小體結(jié)合蛋白1
phospho-HMG14 (Ser20+Ser24)
鋅指蛋白ZBT10抗體 Anti-ZBT10
造血蛋白1抗體 Anti-NCKAP1L/HEM1
環(huán)指蛋白167抗體 Anti-RNF167
泛素樣蛋白Sumo3抗體 Anti-Sumo 3
大鼠 SCUBE1 elisa分析檢測(cè)試劑盒
人胰島細(xì)胞核固紅復(fù)染試劑盒
小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)elisa分析檢測(cè)試劑盒
fructokinase; Hepatic fructokinase; ketohexokinase; Ketohexokinase isoform a; KHK; EC 2.7.1.3; KHK_HUMAN.
人胰島細(xì)胞
人宮頸上皮細(xì)胞
Kasumi-1 人紅白血病細(xì)胞
PC-3人前列腺癌
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。