實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
肥大細(xì)胞（ Mast cell, MC）是和血液的嗜堿粒細(xì)胞一樣，具有強(qiáng)嗜堿粒顆粒的組織細(xì)胞，細(xì)胞核小，位于細(xì)胞中央。
MC分泌多種細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)。此外，還表達(dá)MHC分子，B7分子。有研究表明，MC在超敏反應(yīng)如支氣管**的致病方面起著重要作用，在自身如多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中起作用。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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骨髓組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2184 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常骨髓組織。
2)細(xì)胞鑒定：CD117熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：圓形或卵圓形細(xì)胞，懸浮培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 肥大 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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飲料果膠化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1（ACE1）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測(cè)試劑盒
人補(bǔ)體片段3c(C3c)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠膽囊收縮素八肽（CCK-8）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠載脂蛋白A4(APOA4)elisa檢測(cè)試劑盒
唾液酸結(jié)合性球蛋白樣凝集素1抗體 Anti-Sialoadhesin
染色體濃縮調(diào)節(jié)蛋白2抗體 Anti-RCC2
軸突蛋白2抗體 Anti-Neurexin 2
富含脯氨酸源蛋白1抗體 Anti-WASF1/WAVE 1
轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體 ELYS
自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體 ENPP2
核RNA結(jié)合蛋白P54抗體 NMT55
核糖體蛋白S6激酶樣1抗體 RPS6KL1
NKAPL蛋白抗體 NKAPL
P2Y4受體抗體 P2Y4
三磷酸腺苷受體P2X5b抗體 P2X5b
神經(jīng)生長(zhǎng)因子β重組兔單克隆抗體 NGF
DNAJB14蛋白抗體 DNAJB14
D激酶衰減蛋白2抗體 DOK2
磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體 Phospho-NDRG1 (Thr346)
磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 Phospho-PLCG 2 (Tyr1217)
表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白6抗體 EGFL6
叉頭蛋白P2抗體 FOXP2
腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體 PACAP-27/38
鋅指蛋白547抗體 ZNF547
小鼠金屬硫蛋白2(MT-2)elisa檢測(cè)試劑盒
兔骨髓肥大細(xì)胞PKC ELISA Kit
山羊β-脂蛋白(β-LP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
LAMB2; Laminin beta 2; Laminin subunit beta 2; LAMS; S laminin; LAMB2_HUMAN.
兔骨髓肥大細(xì)胞
人腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
Hs 688(A.T人黑素瘤細(xì)胞
SCC-25人舌鱗癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。