實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腎是脊椎動物的一種器官，屬于泌尿系統(tǒng)的一部分，負責過濾血液中的雜質(zhì)、維持體液和電解質(zhì)的平衡，后產(chǎn)生尿液經(jīng)尿道排出體外；同時也具備的功能以調(diào)節(jié)血壓。
周細胞是一種包圍全身和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腎組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1844 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常腎組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代周細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
DAPI染色試劑盒100T
人β-防御素1(DEFB1)elisa檢測試劑盒
細胞ITK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
小鼠嗜酸性粒細胞過氧化物酶(EPX)elisa檢測試劑盒
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa檢測試劑盒
細胞ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒
乳酸含量（LA）測試盒
紅細胞可溶性膜蛋白（粗提）制備試劑盒
小鼠多肽YY(PYY)elisa檢測試劑盒
血小板反應(yīng)結(jié)構(gòu)域蛋白7A抗體 THSD7A
液泡蛋白分選蛋白45A抗體 VPS45A
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白12抗體（抑制腫瘤蛋白7） LRP12
短鏈脫氫還原酶13抗體 DHRS13
FITC標記人CD326 (Ep-CAM)單克隆抗體 human CD326/FITC
FLJ46536蛋白抗體 RUFY4/FLJ46536
硫辛酰連接酶2抗體 LIPT2
球蛋白E受體Fc ε RIγ抗體 FCER1G
4號染色體開放閱讀框27抗體 C4orf27
7跨膜蛋白超家族成員1抗體 GPCR TM7SF1
激肽原1重鏈抗體 Kininogen 1
鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白2抗體 HCN2
Ras蛋白特異鳥嘌呤核苷酸釋放因子4抗體 RASGRP4
RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 MCG10
絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 Afadin
突觸結(jié)合蛋白12抗體 Synaptotagmin XII
大鼠WAP四二硫化物核心域蛋白1(WFDC1)elisa檢測試劑盒
小鼠腎周細胞Goat Anti-Bovine IgG H&L / Cy5.5
FRMD7蛋白抗體
ARH 9; ARH9; ARHC; H9; MGC1448; MGC61427; Oncogene RHO H9; Ras homolog gene family member C; RAS related homolog 9; RHO C; Rho cDNA clone 9; Rho related GTP binding protein RhoC; Rho-related GTP-binding protein RhoC; rhoC; RhoC GTPase; RHOC_HUMAN; RHOH 9; RHOH9; Small GTP binding protein RhoC.
小鼠腎周細胞
大鼠晶狀體上皮細胞
JHH-7人肝癌細胞
人結(jié)腸癌細胞細胞；COLO678
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。