細(xì)胞簡(jiǎn)介：
微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損已被視為創(chuàng)傷、感染、休克、腫瘤、血管等多種和綜合癥發(fā)展的病理基礎(chǔ)。一旦微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，必然影響甚至破壞微血管內(nèi)皮細(xì)胞正常的生物學(xué)功能，引起多種的發(fā)生。微血管內(nèi)皮細(xì)胞間連接與血管通透性有著非常密切的關(guān)系。微血管內(nèi)皮細(xì)胞合成與分泌前列環(huán)素、一氧化氮、內(nèi)皮源性超極化因子和內(nèi)皮素等物質(zhì)，來(lái)維持血管的正常狀態(tài)。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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皮膚組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2313 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常皮膚組織。
2) 細(xì)胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽(yáng)性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 內(nèi)皮 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人SMAD3 elisa分析檢測(cè)試劑盒
非蛋白質(zhì)巰基測(cè)試盒
石蠟切片組織CASPASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
小鼠Toll樣受體7(TLR7)elisa檢測(cè)試劑盒
NP-40裂解液100ml
人alpha-1腎上腺素能受體(ADRA1)IgG抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒
體液基質(zhì)金屬抑制劑1（TIMP-1）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)elisa檢測(cè)試劑盒
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC16A抗體 SEC16A
組蛋白去甲基化酶JARID2抗體 Jarid2
核糖核蛋白自身抗原抗體 TRIM21
黑色素瘤相關(guān)抗原P97抗體 MFI2/MAP97
OTOL1抗體 OTOL1
PE-Cy5標(biāo)記人CD41單克隆抗體 human CD41/PE-Cy5
神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白PHOX2B抗體 PHOX2B
神經(jīng)元電壓門(mén)控鈣通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗體 CACNG3
DPY19L2蛋白抗體 DPY19L2
ELF5蛋白抗體 ELF5
磷酸化羥化酶抗體 Phospho-TH (Ser31)
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 Phospho-MEK4 (Ser257 + Thr261)
層粘連蛋白抗體 [KO驗(yàn)證抗體] laminin
刺痛感蛋白2抗體 Prickle 2
鋅活化配體門(mén)控離子通道抗體 LGICZ1
鋅指蛋白687抗體 ZNF687
通用型禽白血病A/B/C亞型（ALV-A/B/C）基因檢測(cè)試劑盒
狗皮下微血管內(nèi)皮細(xì)胞Donkey Anti-Goat IgG H&L / Cy7
鋅指蛋白ZBTB12抗體
SE70 2; ZC3H17; acidic rich RS domain containing 2; ARRS2; C13orf10; C86225; CTCL tumor antigen se70 2; cutaneous T-cell lymphoma tumor antigen se70-2; PRO1777; protein expressed in male leptotene and zygotene spermatocytes 393; RNA binding motif protein 26; RNA binding protein 26.
狗皮下微血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠鼻腔粘膜上皮細(xì)胞
NCI-H2023人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；Balb/3T3 （種屬鑒定）